Pewarnaan Gram

Pewarnaan Gram atau metode Gram adalah salah satu teknik pewarnaan yang paling penting dan luas yang digunakan untuk mengidentifikasi bakteri. Dalam proses ini, olesan bakteri yang sudah terfiksasi dikenai larutan-larutan berikut: zat pewarna kristal violet, sodium, larutan alkohol (bahan pemucat), dan zat pewarna tandingannya berupa zat warna safranin atau air fuchsin. Metode ini diberi nama berdasarkan penemunya, ilmuwan Denmark Hans Christian Gram (1853–1938) yang mengembangkan teknik ini pada tahun 1884 untuk membedakan antara pneumokokus dan bakteri Klebsiella pneumoniae. Bakteri yang terwarnai dengan metode ini dibagi menjadi dua kelompok, yaitu bakteri Gram Positif dan Bakteri Gram Negatif. Bakteri Gram positif akan mempertahankan zat pewarna kristal violet dan karenanya akan tampak berwarna ungu tua di bawah mikroskop. Adapun bakteri gram negatif akan kehilangan zat pewarna kristal violet setelah dicuci dengan alkohol, dan sewaktu diberi zat pewarna tandingannya yaitu dengan zat pewarna air fuchsin atau safranin akan tampak berwarna merah. Perbedaan warna ini disebabkan oleh perbedaan dalam struktur kimiawi dinding selnya.

Cara Kerja

Kaca preparat dibersihkan dengan alkohol 70%
Jarum ose dipijarkan kemudian ditunggu hingga dingin, lalu bakteri diambil dari media lalu diratakkan di atas preparat glass
Kaca preparat dipijarkan hingga kering
Larutan zat warna krista violet diteteskan sebanyak 2-3 tetes dan didiamkan selama 1 menit
Preparat diberikan akuades mengalir dan dikeringkan
Larutan Lugol diteteskan dan dibiarkan selama 1 menit lalu dicuci dengan air mengalir dan keringkan
Larutan alkohol asama diberikan selama 30 detik, lalu dicuci dengan air mengalir dan dikeringkan
Larutan safranin diberikan selama 20 detik
Dicuci dengan air mengalir dan dikeringkan
Kaca preparat diamati menggunakan mikroskop dengan perbesaran 10x100x

Rujukan

Gram, HC (1884). "Über die isolierte Färbung der Schizomyceten in Schnitt- und Trockenpräparaten". Fortschritte der Medizin. 2: 185–89.
Bergey, David H. (1994). Bergey's Manual of Determinative Bacteriology (Edisi 9th ed.). Lippincott Williams & Wilkins. ISBN 0-683-00603-7.{{cite book}}: |edition= memiliki teks tambahan; Parameter tidak dikenal |coauthors= diabaikan (|author= disarankan)
Madigan, MT (2004). Brock Biology of Microorganisms (Edisi 10th Edition). Lippincott Williams & Wilkins. ISBN 0-13-066271-2.{{cite book}}: |edition= memiliki teks tambahan; Parameter tidak dikenal |coauthors= diabaikan (|author= disarankan)
Ryan, KJ (2004). Sherris Medical Microbiology (Edisi 4th ed.). McGraw Hill. ISBN 0-8385-8529-9.{{cite book}}: |edition= memiliki teks tambahan; Parameter tidak dikenal |coauthors= diabaikan (|author= disarankan)